Caspase 8 活性检测试剂盒
货号
规格
检测方法
适用样本
保存温度
EY-PY1037
20T
1.酶标仪 2.分光光度计
1.细胞 2.组织
2-8℃ 避光
100T
50T
Caspase-8 活性检测试剂盒(Caspase 8 Activity Assay Kit)是采用比色光度法法检测细胞或组织裂解液中Caspase 8酶活性或纯化的Caspase 8酶活性的试剂盒。 Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中比较上游的一个caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡过程中caspase 8被激活,形成一个由p18和p10组成的二聚体,进一步激活下游的caspase 4,caspase 6,caspase 9和caspase 10。 本Caspase 8 活性检测试剂盒是基于casepase 8可以催化Caspase-8底物产生黄色的pNA,pNA在405nm附近有强吸收,从而可以通过测定吸光度来检测caspase 8的活性。 本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测,可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-8检测。 还可以提供AFC、R110,AMC等荧光标记的Caspase-8 活性检测试剂盒。荧光法检测的灵敏度远高于分光光度法,有荧光检测条件者尽可能选择荧光法的检测试剂盒。没有荧光检测条件,可以选择的比色法Caspase-8活性检测试剂盒,需要确保样品中Caspase-8活化程度足够高。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
Caspase 8 活性检测试剂盒保存温度 2-8℃避光
注意事项 1.Caspase-8底物短期4℃避光保存,长期-20℃避光保存;。 2.Caspase底物在冬季气温较低时在室温时为凝固状态,易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。
有效期 1年
检测方法 1.酶标仪 2.分光光度计
适用样本 1.细胞 2.组织
产品应用 1.酶标仪 2.分光光度计
仪器准备 1.酶标仪/分光光度计 2.离心机 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒
试剂准备 1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) 2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备 1.离心管 2.吸头 3.一次性手套
Caspase 8 活性检测试剂盒一、 裂解缓冲液和检测缓冲液配制 根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液,每1 ml缓冲液中加入10 μl DTT。 充分混匀置冰上备用。 二、 样品处理 A. 细胞样品 1. 收集2-5×106个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。 2. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 在细胞中加入50 μl冷的裂解缓冲液,高速涡旋振荡15秒。 4. 置冰上持续振荡15-30分钟。 5. 在4℃,10000×g条件下离心15分钟。 6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
Caspase 8 活性检测试剂盒1.须自备可以测定A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。 2.37℃下反应如果颜色变化不明显,可以适当延长反应时间。 3.如果样品中蛋白含量低,加大样品量,裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到200-500 μg每样。 4.如果样品中激活的caspase水平很低,适当调节诱导细胞凋亡的时间,找一个caspase激活比较强的时间点进行检测。 5.Caspase-8底物避光保存,使用过程中尽量避光。 6.底物为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。 7.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
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