商品介绍:
细胞名称 Cas9稳定表达的人胰腺癌细胞;PANC-1-Cas9-559
形态特性 上皮样;多角形
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使PANC-1细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo,经400ug/mlG418筛选得到的单克隆,经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白,可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter
Glucose) 10%FBS;400ug/ml G418
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。下列产品详细介绍:
产品名称
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Cas9稳定表达的人胰腺癌细胞;PANC-1-Cas9-559
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形态特性
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上皮样;多角形
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型号
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EX0192
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实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
人参皂苷Rb3(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Ginsenoside
Rb3 英文名称CollagenIVIV型胶原规格:96T/48T 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒 ,英文名: VWF ELISA Kit
人参皂苷Rc(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Ginsenoside Rc 1酸二酯酶1B(Phosphodiesterase1B)0.25单位 人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA检测试剂盒HumanAdenovirusIgG,ADV-IgGELISAKit 96T/48T
人参皂苷Rd(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Ginsenoside Rd ELISAKitTCCC5b-9人末端补体复合物C5b-9规格:48T/96T 大鼠GATA结合蛋白4(GATA4)试剂盒 Rat GATA binding protein 4,GATA4 ELISA Kit
人参二醇(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Panaxadiol 小鼠P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 CLIAKitforsLRELISAKit大鼠可溶性瘦素受体规格:48T/96T
猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型经典株与高致病性变异株双重实时荧光RT-PCR检测试剂盒Ponasterone A1386坡那甾酮A
猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲株与美洲株双重实时荧光RT-PCR检测试剂盒Polypodine B1694水龙骨甾酮B
猪繁殖与呼吸综合征(类NADC0毒株) 实时荧光RT-PCR检测试剂盒Polypodine B ,22-acetonide1598585,22-异丙叉基水龙骨甾酮B
猪细小病毒PCR检测试剂盒/Polyphyllin D7731重楼皂苷D
猪细小病毒实时荧光PCR检测试剂盒Polyhydroxybutyrate267444聚羟基丁酸酯
Cas9稳定表达的人胰腺癌细胞;PANC-1-Cas9-559人血管内皮生长因子受体3(VEGFR3/Flt4)酶联吸附测定试剂盒 别称:FLT41, PCL, LMPH1A Human VEGFR3/Flt4(Vascular Endothelial Cell Growth
Factor Receptor 3) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组VEGFR3/Flt4浓度
操作步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基,使293T细胞悬浮生长。
培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。